ELISA試劑盒組成:
試劑盒組成48 孔配置96 孔配置保存
說明書1 份1 份
封板膜2 片(48)2 片(96)
密封袋1 個(gè)1 個(gè)
酶標(biāo)包被板1×481×962-8℃保存
標(biāo)準(zhǔn)品:540μg/L0.5ml×1 瓶0.5ml×1 瓶2-8℃保存
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1 瓶1.5ml×1 瓶2-8℃保存
酶標(biāo)試劑3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存
樣品稀釋液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存
顯色劑 A 液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存
顯色劑 B 液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存
終止液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存
濃縮洗滌液(20ml×20 倍)×1 瓶(20ml×30 倍)×1 瓶2-8℃保存
影響ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)的因素
一、試劑盒
1、抗原、抗體活性對(duì)效價(jià)的影響:主要是試劑中抗體(或抗原)的效價(jià)降低或失活,結(jié)果不易判斷。再有ELISA法靈敏度高,對(duì)雜質(zhì)的反應(yīng)靈敏度也高,實(shí)驗(yàn)中空白對(duì)照OD值偏高或假陽性;
2、酶結(jié)合物濃度過高,也會(huì)導(dǎo)致OD值假性增高。
二、試驗(yàn)儀器
1、ELISA試劑盒加樣器是否經(jīng)過校正,酶免測(cè)定血清用血量很少,如手工加樣器的性能不好,吸取樣品不,會(huì)使結(jié)果忽高忽低;
2、每次洗板前,應(yīng)檢查洗板機(jī)針孔有無堵塞。
三、操作
1、檢測(cè)前先將試劑盒從冰箱取出置室溫平衡20min后使用,試劑用完及時(shí)放回冰箱冷藏,以免造成試驗(yàn)結(jié)果假性降低;
2、加樣時(shí)注意勿觸及包被板底部,以免擦傷包被物使抗體(抗原)脫落而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性;
3、洗滌不充分,會(huì)使結(jié)果假性增高,過分洗滌呈假陰性;
4、比色時(shí)應(yīng)保持包被孔底部無異物、無水汽,特別是冬季板從37℃水浴箱取出時(shí),底部留有水汽,應(yīng)將板底擦干后進(jìn)行比色,水汽或孔內(nèi)氣泡也會(huì)使OD值升高;
5、抗原與抗體反應(yīng)達(dá)到完全平衡,依賴于溫度與時(shí)間。溫度45℃易引起失活及標(biāo)記物脫落,溫度低于4℃,影響反應(yīng)速度。
elisa試劑盒價(jià)格具有以下優(yōu)點(diǎn):
1)快速: 僅需傳統(tǒng)夾心法ELISA 1/3的操作時(shí)間,1小時(shí)即可完成整個(gè)試驗(yàn)流程;
2)簡(jiǎn)單: 只需1個(gè)洗滌步驟;
3)靈活: 可單或同時(shí)檢測(cè)總蛋白及磷酸化蛋白,可在同一板上檢測(cè)不同的靶蛋白;
4)靈敏: 達(dá)到甚至超過行業(yè)標(biāo)準(zhǔn),且結(jié)果一致性良好;
5)兼容: 常規(guī)比色法檢測(cè),實(shí)驗(yàn)室常規(guī)酶標(biāo)儀讀數(shù);
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【測(cè)試種屬】犬、大小鼠、人、豚鼠、兔子、牛羊、豬、雞鴨elisa試劑盒等種屬
【儲(chǔ)存方式】:2-8℃
【檢測(cè)目的】用于測(cè)定血清,血漿及相關(guān)液體等樣本。例如適合檢測(cè)包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本。
【用途】科研實(shí)驗(yàn),不用于臨床診斷。
酶聯(lián)吸附測(cè)定原理
ELISA遵守以下3個(gè)核心原理:1)抗原或抗體能吸附于固相載體表面,并保持其學(xué)活性;2)抗原或抗體可通過共價(jià)鍵與酶連接形成酶結(jié)合物,而此種酶結(jié)合物仍能保持其學(xué)和酶學(xué)活性;3)酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后,可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來判定是否有反應(yīng)的存在,而且顏色反應(yīng)的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的,可根據(jù)已知濃度的抗原或抗體的顏色反應(yīng)的深淺繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并依此計(jì)算出未知樣品中抗體或抗原的濃度。在ELISA中酶起到很關(guān)鍵的作用,常用于ELISA法的酶有辣根過氧化物酶,堿性磷酸酯酶等,其中尤以辣根過氧化物酶為多。酶結(jié)合物是酶與抗體或抗原, 半抗原在交聯(lián)劑作用下聯(lián)結(jié)的產(chǎn)物,它不僅具有抗體抗原特異的反應(yīng),還能催化酶促反應(yīng),顯示出生物放大作用。
ELISA試劑盒保溫的方式除有的ELISA儀器附有特制的電熱塊外,一般均選用水浴,可將ELISA試劑盒板置于水浴箱中,ELISA板底應(yīng)貼著水面,使溫度敏捷平衡。為防止蒸騰,板上應(yīng)加蓋,也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔,此時(shí)可讓反響板漂浮在水面上。若用保溫箱,ELISA試劑盒應(yīng)放在濕盒內(nèi),濕盒要選用傳熱性良好的資料如金屬等,在盒底墊濕的紗布,后將ELISA板放在濕紗布上。濕盒應(yīng)先放在保溫箱中預(yù)溫至規(guī)則的溫度,特別是在氣溫較低的時(shí)候更應(yīng)如此。
為什么ELISA反響總是需求一定時(shí)刻的溫育?
ELISA屬固相測(cè)定,抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生,以抗體包被的夾心法為例,加入板孔中的標(biāo)本,其間的抗原并不是都有平等的和固相抗結(jié)合的時(shí)機(jī),只有貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸,這是一個(gè)逐步平衡的進(jìn)程,因而需經(jīng)擴(kuò)散才能到達(dá)反響的結(jié)尾。在這以后加入的酶標(biāo)記抗體與固相抗原的結(jié)合也同樣如此。
溫育常選用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃等。
37℃是實(shí)驗(yàn)室中常用的保溫溫度,也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的適宜溫度,在建立ELISA方法作反響動(dòng)力學(xué)研究時(shí),實(shí)驗(yàn)表明,兩次抗原抗體反響一般在37℃經(jīng)1~2小時(shí),產(chǎn)品的生成可達(dá)高峰。為加快反響,可進(jìn)步反響的溫度,有些實(shí)驗(yàn)在43℃進(jìn)行,但不宜選用更高的溫度??乖贵w反響4℃更為,在放射測(cè)定中多使反響在冰箱中過夜,以構(gòu)成多的沉淀。但因所需時(shí)刻太長(zhǎng),在ELISA試劑盒中一般不予選用。
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